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小鼠ELISA定量试剂盒原理与特点

2025/7/18 23:11:31发布43次查看
小鼠elisa定量试剂盒原理:
采用竞争法测定金黄地鼠氧化低密度脂蛋白oxldl水平。用金黄地鼠氧化低密度脂蛋白oxldl抗原包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入hrp标记的oxldl抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。反复洗涤后加底物tmb显色。tmb在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的oxldl含量呈负相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(od值),根据标准曲线,计算测试样品中oxldl浓度。
小鼠elisa定量试剂盒特点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、节省实验经费。
小鼠elisa定量试剂盒操作程序:
1. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
2. 每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。。
3. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
4.测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(od值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
5.根据标准品的浓度及对应的od值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的od值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
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