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Taq DNA连接酶应用范围

2025/11/21 15:04:24发布19次查看
taq dna连接酶应用范围
taq dna 连接酶是一种热稳定性连接酶,能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 dna 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。taq dna 连接酶催化的连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 dna 完全配对,并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内,taq dna 连接酶均有活性。
应用
双链dna切刻的修复
用于gibson组装方法的建立
活性定义
1 单位指 50μl 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟内能使 50% 的1μg 经 bsteii 消化的 λdna 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。
储存
-20℃可保存半年,长期储存请置于 -70℃。
1× taq dna 连接酶反应缓冲液
20 mm tris-hcl(ph 7.6),25 mm kac,10 mm mg(ac)2,10 mm dtt,1 mm nad 和 0.1% triton x-100,45℃ 温育。 该酶需 nad+ 作辅因子,在 10× taq dna 连接酶缓冲液中已添加 nad+;为了延长 nad+ 的半衰期,缓冲液应于 -70℃ 贮存。
合成酶,能催化两个分子连接成一个分子或把一个分子的尾相连接的酶。此反应与atp的分解反应相偶联。在把两分子相连接的同时发生三磷酸腺苷(atp)的高能磷酸键的断裂如dna连接酶等。
连接酶是酶分类中重要的一类(ec 6):6.1形成c-o键;6.2形成c-s键;6.3形成c-n键;6.4 形成c-c键。
连接酶的催化反应过程需要mg离子
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