非蛋白巯基检测试剂盒商品货号:ms1520
英文名称:non-protein sulfhydryl group assay kit
别名:非蛋白质巯基试剂盒 非蛋白质巯基测试盒
检测方法:微量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
ms1520-100管/48样 索桥生物 100管/48样 ¥200.00元
产品详细介绍
测定意义:
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理:
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(dtnb)反应,生成黄色化合物,在412nm处有大吸收峰。
产品说明书货号:ms1520 规格:100 管/48 样
非蛋白巯基测定试剂盒说明书 微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功 能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理:
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(dtnb)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处 有大吸收峰。 自备实验用品及仪器: 天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100 ml×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15 ml×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 1 ml×1 管,4℃避光保存。
样品的制备:
1. 动物、植物组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液)进行冰浴匀浆,然后加入 4ml 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g, 4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细 胞加入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min) 然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
3. 血清、培养液:取 0.1ml,加 0.4ml 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g,4℃离心 10min, 取上清置冰上待测。
操作步骤:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、操作表
对照管 测定管
样品(μ l) 40 40
试剂一(μ l) 150 150
试剂二(μ l) 10
h2o(μ l) 10
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.7236 x,r 2 = 0.9994
1. 组织:
非蛋白质巯基含量(μ mol/g 鲜重)= 1.7236 /a ×v 反总÷ (v 样÷v 样总×w) ×5=14.5×δ a÷ w
2. 血清、培养液:
非蛋白质巯基巯基含量(μ mol/ml)= 1.7236 /a ×v 反总÷v 样×5=14.5×δ a
3. 细胞:
非蛋白质巯基含量(μ mol/10^4)= 1.7236 /a ×v 反总÷ (v 样÷v 样总×细胞数量) ×5 =14.5×δ a÷细胞数量
v 反总:反应总体积,0.2ml;v 样:反应中样品体积,0.04ml;v 样总:加入提取液体积,1ml; w:样品质量,g ;cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;
注意事项: 低检出限为 10μ mol/l。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.8618x,r 2 = 0.9994
1. 组织:
非蛋白质巯基含量(μ mol/g 鲜重)= 0.8618 /a ×v 反总÷(v 样÷v 样总×w)×5= 29×δ a÷w
2. 血清、培养液:
非蛋白质基含量(μ mol/l)= 0.8618/a ×v 反总÷v 样×5=29×δ a
3. 细胞:
非蛋白质巯基含量(μ mol/10^4)= 0.8618 /a ×v 反总÷ (v 样÷v 样总×细胞数量) ×5 =29×δ a÷细胞数量
v 反总:反应总体积,0.2ml;v 样:反应中样品体积,0.04ml;v 样总:加入提取液体积,1ml; w:样品质量,g ;cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;
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