海藻糖合成酶（ts）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：ba1941
产品规格：100t/48s
产品简介：
海藻糖是功能性低聚糖，具有非还原性、保湿性、热酸稳定性、抗冻结性等特性，是细胞在不良环境条件下产生的一种重要的抗逆应激物之一，它对生物大分子和生物组织有着非特异性的保护作用。
海藻糖合成酶（trehalose synthase，ts）能催化麦芽糖生成海藻糖，是海藻糖生物合成的关键途径之一。本试剂盒使用糖化酶分解剩余麦芽糖为葡萄糖，通过葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量，按照麦芽糖减少的量表示海 藻糖合成酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体60ml×1瓶
2-8℃
试剂一
液体6ml×1瓶
2-8℃
试剂二
粉剂×2瓶
2-8℃
试剂三
液体15ml×1瓶
2-8℃
试剂四
液体15ml×1瓶
2-8℃
标准品
粉剂×1支
2-8℃
溶液的配制：
1.试剂二：临用前先加入6ml蒸馏水，震荡使其充分溶解（若溶解后的试剂中有黑色颗粒物，可离心后取上清使用），用不完的试剂4℃保存2周。
2.工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四1:1等体积混合，根据样本实际所需用量现配现用。
3.标准品：临用前加入1ml蒸馏水配制成50μmol/ml 的麦芽糖标准溶液，用不完的试剂4℃保存2周。然后用蒸馏水8倍稀释成6.25μmol/ml的麦芽糖标准溶液（建议吸取25μl 50μmol/ml麦芽糖标准溶液，加入175μl蒸馏水中，充分混匀）待测，现配现用。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液， 超声波破碎细胞（功率200w，超声3s，间隔9s，重复30次）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤），置于冰上待检。
组织：按照组织质量（g）: 提取液体积（ml）为1 : 5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）， 进行冰浴匀浆。8000 g，4℃，离心10min，取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤，置于冰上待检。
二、测定步骤
1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2.在ep管中进行如下操作：
（1）酶促反应
试剂名称（μl）
对照管
测定管
标准管
空白管
样本
50
50
-
-
试剂一
-
50
-
-
标准溶液
-
-
50
-
蒸馏水
-
-
50
100
充分混匀，35℃水浴反应2h，沸水浴5min终止反应，冷却至室温
试剂一
50
-
-
-
试剂二
100
100
100
100
混匀，40℃过夜反应（12h以上），沸水浴5min终止反应，冷却至室温。10000g，25℃离心10min，取上清待测。
（2）显色反应（在ep管或96孔板中进行以下操作）
试剂名称（μl）
对照管
测定管
标准管
空白管
上清液
20
20
20
20
工作液
180
180
180
180
充分混匀，37℃反应30min，于微量玻璃比色皿或96孔板中测定505nm处的吸光值，分别记为a对照、a测定、a标准与a空白，δa测定=a对照-a测定、δa标准=a标准-a空白。
注：空白管和标准空白管均只需做1-2次。
三、酶活性计算
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。
ts酶活（u/mg prot）= c标×δa测定÷δa标准×v样÷（v样×cpr）÷t×f×1000÷2
=26.041×δa测定÷δa标准÷cpr×f
2.按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。
ts酶活（u/g 质量）= c标×δa测定÷δa标准×v样÷（v样÷v样总×w）÷t×f×1000÷2
=26.041×δa测定÷δa标准÷w×f
3.按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每104个细菌或细胞每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。
ts酶活（u/104cell）= c标×δa测定÷δa标准×v样÷（v样÷v样总×cell）÷t×f×1000÷2
=26.041×δa测定÷δa标准÷cell×f
c标：标准管浓度，6.25μmol/ml；v样总：加入提取液体积，1ml；v样：加入样本体积，0.05ml；t：反应时间，120min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；cell：细胞或细菌总数，以万计；f：稀释倍数；2：1分子麦芽糖可转化为2分子葡萄糖。
注意事项：
1.当吸光值大于1.5或者δa测定大于1时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。