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抗体的分装与保存阐述

2024/4/16 14:46:58发布5次查看
机体在抗原物质刺激下,由b细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原抗体抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。免疫球蛋白是结构及化学的概念,而抗体是生物学及功能的概念。可以说,所有抗体都是免疫球蛋白,但并非所有免疫球蛋白都是抗体。抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果。如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
1. 收到抗体后请在12000rpm 离心1-5min, 将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来后再打开管盖进行分装和保存!
2.对绝大多数抗体来说,保存在-20 ℃是wan全足够的。没有任何证据显示保存在-80℃ 会有更多的好处!
3. 分装的量以一次实验用完为好,最少不要少于10ul 每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4 度,避免再冻起来!
4. 大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性是没有影响的,因蛋白在高浓度时更不容易降解。所以如果抗体很快(1-2 周)会使用,推荐在4 ℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则最好是在-20 ℃ 或-80 ℃。而对于抗体工作液来说最好当天配制当天用完。
5.为了避免反复冻融,很多抗体公司会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融,甘油在-20 度 会降低冰点,这对很多抗体可能是可行的。但加入甘油的溶液不建议在-80 度保存,因为这已经超过了甘油的冰点。
6.因蛋白在高浓度时更不容易降解,因此部分抗体公司通过在抗体中加入bsa 等蛋白质稳定剂来提高蛋白质浓度以达到保护抗体的目的。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
7.为了防止微生物污染,抗体溶液中一般会加入终浓度0.02% (w/v)的叠氮化na。但在一些特殊情况下,如抗体用于处理活细胞和体内研究,以及要偶联带有氨基基团的抗体时,需要除去叠氮化na。通常的去除方法有凝胶电泳和超滤法。
特殊抗体的保存条件:
1. 酶联抗体:保存在4 ℃,避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失
2. 偶联抗体:所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体,对光极为敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的。偶联后的抗体可以加入叠氮化na保存,但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体,thimerosal(merthiolate)可以替代叠氮化na作为保护剂。
3. igg3 的同型对照:永远保存在4 度,避免冻起来。因为如果出现冻融过程,该抗体非常容易形成多聚体
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