1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的*抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01m tbs或0.01m pbs洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的abc工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01m tbs或0.01m pbs洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入tmb显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有 明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入tmb终止液0.1ml/孔。（显色反应z长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定o.d.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了n倍，其实际浓度应该×n。
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