一.材料与仪器
1.冻存hela s3细胞
70%乙醇mem-10/ edta
旋转瓶培养基5 25 cm2组织培养瓶c02培养箱sorvall h-6000a转子100 ml或200 ml通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖.
二、步骤
1.将含有冻存hela s3细胞的安瓿放入379c水浴中解冻。
2.用70%乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有5 ml mem-10 培养基的25 cm2组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,放入5% co2加湿培养箱中37°c培养过夜。
3.将培养基吸出,用0.5 ml 37%c的/edta覆盖细胞,消化30~40 s。
4.加入10 ml旋转瓶培养基.5 ,并将细胞转移至50 ml的离心管中。室温1800g离心5min,弃上清。
5.将细胞沉淀悬浮在5 ml的旋转瓶培养基5中，上下吹打,将细胞团打散。
6.在100 ml或200 ml通气旋转瓶中加入50 ml旋转瓶培养基-5 ,并将细胞悬液转移到瓶中。
7.取出1 ml细胞悬液,用血细胞计数器(附录3f)进行细胞计数。加入适量的旋转瓶培养基5 ,使细胞密度为(3~4) x 105细胞/ml。将细胞放入无co2培养箱, 37°c旋转培养。
8.随后的两天让细胞继续生长,并且每天对细胞进行计数,加入适量的旋转瓶培养基-5以维持( 3~4) x105细胞/ml的细胞密度。
9.取1 ml的细胞悬液,用血细胞计数器对细胞进行监测。
10.当细胞密度达到(4~5) x105细胞/ml时,隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5x105或2.5x105细胞/ml.
11.分别将装有50 ml或100 ml细胞悬液的100 ml或200 ml通气旋转瓶放入37°c无co2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。
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以上是浅谈悬浮细胞培养的正确方法，你知道了吗？
关键词：培养箱