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液相色谱建立梯度洗脱的方法

2024/3/3 10:34:48发布23次查看
液相色谱仪建立等度洗脱方法的主要步骤如下:
1选择基本色谱条件:
色谱柱:15mm×4.6mm或25mm×4.6mm,c8或c18反相填料,5μm粒度。
流动相:水-乙腈(5~99%)b可变。
梯度时间为:25min(2ml/min)到50min(1ml/min)。
2调整梯度范围
尽可能减少分离开始和结束时的时间浪费(没有色谱峰只走基线。
3调整分离度
如果色谱图有很多峰分离度不好,可以延长tg,要延长天g可以增加柱长,减小填料的颗粒度,降低流动相速度。调节tg、流动相速度和柱尺寸来保持平均容量因子值。
4调节峰容量
调节到色谱图中能容纳所有的峰,改变流速以便使峰与峰的距离合适
5如果要进一步改变峰间距,就改变有机溶剂的成分。
6如果样品的相对分子质量大于500,就按s比例增加tg。s可按下面数据进行估计:
样品相对分子质量
s
样品相对分子质量
s
100
1000
4
10
10000
100000
30
100
关键词:液相色谱仪 色谱柱
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