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RNA提取实验的步骤

2024/2/28 21:18:08发布24次查看
rna 提取是指从样品中纯化 rna 的过程。 rna提取的常规方法称为硫氰酸胍-苯/酚-氯/仿提取。 guanidinium thiocyanate 使蛋白质变性。此外,它破坏水分子的氢键并用作离液剂。 rna 提取中使用一种特殊试剂,称为三试剂。它含有硫氰酸胍、苯/酚和乙酸钠。 rna 提取的基本步骤的目的与 dna 提取的目的相似。 rna 提取的方案如下所述。
1. 用冰冷的 pbs 洗涤细胞以维持细胞的渗透压。
2. 吸出细胞并用 tri-reagent 匀浆样品。
3. 加入氯/仿并摇匀。
4. 离心可能会出现三层。顶层是透明的水层。中间层或界面包含沉淀的 dna。底层是有机层,呈粉红色。
5. 除去水层并加入异丙醇。离心可能会产生沉淀。
6. 用 75% 乙醇清洗沉淀。空气干燥颗粒。
7. 用 te 缓冲液或水溶解沉淀。
rna 提取一般在 ph 值低于 7 时进行。在碱性 ph 值下,由于核糖的 2' 位置存在 oh 基团,rna 更容易被碱性水解降解。 此外,rna 在酸性 ph 值下倾向于保留在水相中。
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