dna甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在cpg双核苷酸中胞嘧啶的5’utr区，起调控作用。cpg的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的cpg岛中。bsp甲基化测序（bisulfite genomic sequencing pcr）的原理通过对基因组dna进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成*，在随后的pcr反应中*转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的pcr产物进行ta克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。通过对疾病及正常对照样本的靶基因进行甲基化分析，在研究肿瘤发生机制及早期诊断等方面均具有重要的临床意义。
实验流程
q：常见的甲基化测定方法有哪些，优缺点是什么？
常见方法
优缺点
msp法（methylation-specific pcr，msp）：重亚硫酸盐处理基因组dna，分别设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行pcr。通过电泳检测msp扩增产物，如果对甲基化dna链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。
无需挑克隆测序，步骤简单，但对引物设计的要求较高，容易出现pcr假阳性，影响实验结果分析。
bsp法（bisulfite sequencing pcr ，bsp）：重亚硫酸处理基因组dna，设计bsp引物扩增，将pcr产物克隆至t载体测序，分析cpg位点是否发生甲基化。
可明确样本待测区段每个cg位点的甲基化程度；受实验方法和价格因素限制无法高通量。
高分辨率熔解曲线法（high resolution melting ，hrm）：重亚硫酸处理基因组dna，未甲基化的胞嘧啶经pcr扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，导致样品中的gc含量发生改变后溶解温度变化，从而进行分析。
检测方法高通量，但是无法明确每个cg位点的甲基化程度。
客户须知：
实物
数据信息
实验周期
客户提供
待测样本
待测序列信息
7周或以上
我们提供
无
基本实验步骤、测序报告、圈点图
收费标准
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