最佳插入片段载体比需实验确定
（插入片段载体）常为最佳比，摩尔数比或也行
应测定比值范围
连接用 x连接液,质粒dna,w单位的t连接酶，插入片段共
室温保温小时，或℃过夜
在这种温度下，缺t-凸出端的载体会自连，产生蓝斑
室温保温小时能满足大多数克隆要求，为提高连接效率，需℃过夜
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