军科院生物工程所曾比较了四种商品化微载体对vero细胞生长的影响。他们先取适量的微载体,然后用pbs浸泡过夜,再吸出pbs,用pbs清洗3次,再高压消毒后,加入含1%新生牛血清的dmem/f12,放置在37℃培养箱备用。
vero细胞则按2x105细胞/ml接种培养瓶和转瓶,再加入含1%新生牛血清的dmem/f12,置37℃培养箱培养。需要时进行传代。之后将该细胞作为种子细胞。
然后将固定质量的4种微载体分别移入250mlbellco搅拌式细胞培养瓶。vero细胞接种后,补足培养基至100ml,设置搅拌速度为30r/min悬浮培养。根据培养基颜色在必要时更换新鲜培养基。
研究人员用显微镜观察细胞形态,并取1ml细胞悬液进行细胞计数以测定vero细胞密度和活力(仪器采用细胞密度和活力自动分析仪),采用多参数生物分析系统定量检测细胞培养上清中的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺浓度,因而可测算葡萄糖比消耗速率,乳酸比生产速率等。
微载体固定化培养被广泛应用于病毒疫苗和重组蛋白药物生产。结果显示,在四种商品化微载体中,cytodex 1微载体(固体实心微球)效果较好,细胞密度高。同时细胞代谢速率在四种微载体中都很接近。研究者还指出,vero细胞在接种后24h才基本完成贴壁阶段。
在该次培养中,新生牛血清用量为1%,虽然用量较少,但仍不可缺少。上海威正翔禹生物公司进口的澳洲产ausbian精制新生牛血清(γ照射)系新西兰血源(来自新西兰政府兽医管理局监管下的具有出口注册证的正规屠宰场),gmp标准生产。
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参考文献
刘红,等. vero细胞在不同微载体固定化培养中的生长和代谢. 现代生物医学进展. 2012, 12 (36): 7001-7006
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