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荧光定量PCR耗材的使用和选择注意几点

2019/5/16 11:41:21发布122次查看
高通量的96孔pcr板和8联管是在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction ,pcr)中,主要作为参与扩增反应的引物、taq dna聚合酶、dntp、模板核酸、mg、缓冲液等的承载物。医疗级聚丙烯(pp)材质因其极高的纯净度和稳定性,能更好适应pcr反应过程中反复高低温设定,并且能够实现高温高压灭菌操作,常常被用于pcr耗材的生产。随着荧光定量pcr技术的普及,该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有dna,rna的研究领域。
如何正确使用96孔pcr孔板
pcr板有透明和乳白色可选,其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量pcr仪(如伯乐cfx系列,abi 7500fast 以上型号, roche 480系列),但如果荧光定量pcr仪是底部光源的,则应选择透明的。
pcr板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式,不同厂家的荧光定量pcr仪会设计不同的切角或边缘凸起,请选择适合该pcr仪的板子。
pcr板又分100ul体积(矮板)和200ul体积(高板),根据机型的不同选择,选择不同高度孔板,避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。
当使用96孔板做荧光定量pcr实验的时候,推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是:先沿着96孔板的纵向压膜,然后横向,最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示:
加样后会在管壁上飞溅一些小液滴,另外反应体系内也会有一些气泡,需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。
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