3t3-l1鉴别协议
材料
杜尔贝科改良鹰培养基(dmem;gibcobrl cat_11965-084:高葡萄糖,含l-谷氨酰胺,含盐酸焦氧化碱,不含丙酮酸钠)
calf serum(gibcbrl cat)16170- 078/批次(1060198)
胎牛血清(gibcobrl cat 10433-028/批次1026566)-过滤器在混合到dmem之前消毒(0.22um过滤器)
异丁基甲基黄嘌呤(ibmx;sigma i-7018)
地塞米松(sigma d-4902)
胰岛素(牛;sigma i-5500)
mem丙酮酸钠(100 mm;gibcobrl cat_11360-070)
pen/strep/谷氨酰胺(100x p/s/g;gibcobrl cat 10378-016)
解决
10%小牛血清/dmem
60ml犊牛血清
6ml 100 mm丙酮酸钠
6ml100x p/s/g
500毫升dmem
10%个fbs/dmem
60ml胎牛血清(过滤消毒)
6ml 100 mm丙酮酸钠
6ml100x p/s/g
500毫升dmem
ibmx溶液(新鲜)
a)在0.5n氢氧化钾溶液中溶解ibmx,最终浓度为0.0115g/ml。
b)通过0.22 mm注射器过滤器进行过滤消毒。