PCR出现非特异性扩增带原因与对策

2026/2/19 2:17:45发布13次查看

pcr扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：
1、引物与靶序列不wan全互补、或引物聚合形成二聚体。
2、mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及pcr循环次数过多有关。其次，是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶的量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：
①必要时，重新设计引物。
②减低酶的量或调换另一来源的酶。
③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。
④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸，也叫两步法)。

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