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细胞凋亡检测形态学检测方法及缺点

2026/2/19 2:07:45发布17次查看
细胞凋亡检测的早期形态学改变是核染色质浓聚、固缩,聚集在核膜周边,然后是胞浆浓缩、胞膜起泡,继而细胞核裂解成若干碎片,细胞膜将胞质和染色质断片包裹,胞浆内形成多个膜结构尚完整的“小泡”及 “凋亡小体” (apoptoticbody)。这不同于细胞坏死的细胞肿胀、胞膜破裂、细胞崩解。
根据凋亡细胞固有的形态特征,至今为止,已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
一、光学显微镜观察
凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染,形成致密质块,有时可碎裂。在he染色的组织切片中细胞体积缩小,胞质致密、嗜酸性染色增强,并可形成凋亡小体。在组织中凋亡细胞常以分散单个形式存在,凋亡细胞与周围细胞分离,不引起炎症反应。
本方法简便易行,但在细胞密集的组织中对于改变不典型的细胞判断较困难,常缺乏较为特征的指标,具有较强的主观性,重复性差。本方法可用于调亡现象的初步观察,作为分析指标之一。
检测方法:细胞涂片或组织石蜡切片作he染色或giemsa染色,在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变,结合显微测量工具可作凋亡细胞计数。
二、视频时差显微技术
此方法用于细胞培养,通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程,尤其是观察细胞表和外形的变化。凋胞与基质分离,胞体变圆、收缩、出泡,有的细胞拉长,出现钉状突起,特续数小时后细胞膜破裂,细胞溶解,通过连续观察,本方法可养壑培养中的凋亡细胞,但不能用于病理组织。
检测方法:收集2×105细胞/ml培胞,置于多孔培养板,加入凋亡诱导剂,在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变,每隔分钟30秒作序列摄影,连续24小时。如同进进行荧光染色,可参荧光晃微镜下观察和摄影。
三、电子显微镜观察
虽然光学显微镜下可以看见胞膜起泡现象和凋亡小体,但凋亡细胞的形态学变化大多发生在超微结构,因此用光镜观察难以令人满意,而透射电镜可清楚地观察到细胞结构在凋亡不同时期的变化。电镜形态学观察是迄今为止判断凋亡经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。
缺点:
(1)只能定性,不能定量;
(2)标本处理过程复杂,设备相对昂贵,对检查者的技术水平要求较高,不适于大批标本检测;
(3)在组织切片上进行电镜观察时,有时凋亡很难与正常细胞有丝分裂相鉴别,因为两种情况下都可出现染色质浓聚。如同时进行荧光染色,可弥补电镜检查的不足。
细胞凋亡检测检测方法:透射电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定,丙酮脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸枸椽酸电子又重染色,透射电镜观察。扫描电镜标本经戊二醛和饿酸双重固定,乙醇逐级脱水,co2临界点干燥,真空喷金,扫描电镜观察。
benzaldehyde (list chemical) 苯甲醛标准品 100-52-7 1ml
poloxamer liquid 泊洛沙姆液标准品 9003/11/6 1ml
phenylethyl alcohol 苯乙醇标准品 1960/12/8 1ml
间甲酚 1ml
lutein 叶黄素标准品 1ml
苍白松果菊标准品 97281-15-7 1g
powdered ashwagandha extract 醉茄粉末提取物标准品 90147-43-6 1g
polyoxyl 20 stearyl ether (as) 聚氧乙烯硬脂酸酯20标准品 9005-00-9 1g
polyoxyl 2 stearyl ether (as) 聚氧乙烯硬脂酸酯2标准品 9005-00-9 1g
polyoxyl 10 stearyl ether 聚氧乙烯硬脂酸酯标准品 9005-00-9 1g
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