1、细胞准备：细胞传到后，荧光定量pcr，密度达到70％左右时进行转染；
2、细胞转染:取两个ep管，一个加入opti-mem、核心质粒和包装质粒；另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀；
3、细胞孵育：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；
4、收集病毒：转染后48h、72h收集含慢病毒的上清；
5、滴度检测:细胞为30%－50％时加入病毒上清液，检测阳性细胞比例。
腺病毒包装原理介绍
腺病毒是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒，由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子，两端各有长约100bp的反向重复序列。*腺病毒 已知有33种，*检测怎么做，分别命名为ad1-ad33，研究详细得是ad2.
腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒，遗传物质为线型 双股dna形式。腺病毒的特点：（1）gan染范围广对人致病性低；（2）对增殖和非增殖细胞均具有gan染性；（3）能有效进行增殖；（ 4）病毒滴度高；（5）不整合到染色体中，无插入致突变性；(6)外源*装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体 外*转导、体内接种yi苗、和*zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的*序列；
2.构建病毒表达载体质粒；
3.表达载体质粒和包装质粒重组；
4.gan染hek293，包装出病毒；
5.病毒扩增、浓缩；
6.滴度测定。
分子实验介绍——印迹（western blot）检测
通过sds-page凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过page分离的蛋白质样品，广西pcr，转移到固相载体（例如纤维素薄膜或pvdf膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为*原，与对应的起反应，再与酶或同位素标记的第二起反应（目前主要用hrp标记的第二），fish检测，经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特异性目的*表达的蛋白成分（目前主要使用鲁米诺和二*中的hrp反应发出荧光，通过仪器或者胶片显色）。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验流程：细胞收集-细胞裂解，蛋白提取-蛋白变性-sds-page电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二*孵育-显色拍照
结果示例：
图 a不同大小的质粒转染细胞后，western blot检测图片；b a蛋白不同培养时间后western blot检测图片；c 使用image pro plus软件对a蛋白灰度检测，a蛋白表达变化统计图
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