注意:体内细胞刺激将激l活可用arf 6的大约10%,而体外gtpγs蛋白负载将激l活arf 6的将近90%。
1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的arf 6蛋白)。
2,向每个试管中加入20 μl 0.5 m edta(终浓度为20 mm)。
3,将5 μl 100 xgtpγs(至100 μm,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4,在第二个试管中加入5 μl 100 x gdp(至1 mm,终浓度)(阴性对照)。
5,在搅拌下将试管在30°c孵育30分钟。
6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 m mgcl2(至60 mm,终浓度)来停止加载。
纽斯特生物技术有限公司推出的cd*2活性检测*盒主要是依据单克l隆*l体能够特异性的识别cd*2-gtp结合蛋白,rac1 kit,而不识别cd*2-gdp结合蛋白,进而简单并且快速的进行cd*2的活性检测。同时*盒中的cd*2-gtp单克l隆*l体也可以进行免l疫组化实验中细胞和组织中cd*2的活性监测。每套*盒可以进行20次检测。
目前还没有直接测定arl1-gtpase活性的方法。neweast biosciences arl1激l活检测*盒是基于特定构型的单克l隆*l体特异性识别arl1 gtp,但不识别arl1 gdp的*l体。鉴于克l隆*l体对其*原,活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠,重现性一致。
这些*arl1-gtp单克l隆*l体也可用于监测细胞中arl1的激l活免l疫组织化学检测。neweast biosciences arl1激l活分析*盒提供了一种简单、快速的方法来监测激l活arl1。每个*盒提供足够的量来进行20次分析。
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