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质粒DNA提取实验的实验步骤

2025/12/13 21:44:34发布28次查看
一、其它elisa免疫检测试剂盒材料与试剂准备
1. 材料:大肠杆菌。
2. 仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪。
3. 试剂:
(1)solution i :25 mm tris-hcl(ph7.4),10 mm edta(ph8.0),50 mm葡萄糖,高压灭菌,4℃保存。
(2)solution ii :0.2 m naoh, 1%sds 现配现用。
(3)solution iii :5 n kac ph4.8,高压灭菌,4℃保存。
(4)3 m naac ph5.2,高压灭菌,4℃保存。
(5)异丙醇,*(8 mg/ml),酚,无水乙醇,70%乙醇,lb培养基,电泳试剂。
二、其它elisa免疫检测试剂盒操作步骤
1. 细菌繁殖:lb培养基,2 ml/20ml,37℃,200 rpm,摇一摇,过夜。
2. 离心10 min,5 000 rpm, 4℃;弃上淸液。
3. 沉淀(菌体细胞)预冷的tes缓冲液洗涤,离心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入预冷的1 ml solution i,冰浴10 min。
4. 重新悬浮,加入150 ul*母液,室温放置5 min。
5. 加入1.2 ml solution ii, 冰浴5 min。
6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12 000 rpm,4℃。
7. 加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min。
8. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。
9. 取沉淀,悬于400 ul te缓冲液中。
10. 加入40 ul,3 m naac。
11. 酚,抽提,乙醇沉淀。
12. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。
13. 取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul te缓冲液中。
14. 电泳检测提取dna的质量其它elisa免疫检测试剂盒。
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