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液相色谱法测定人血浆中的*和*

2025/12/12 17:49:59发布21次查看
安捷伦液相色谱仪1100,附紫外检测器(spd-10avp/10avvp);2010色谱工作站;at-230columnheater。*的精制品、*精制品(内标氟氯西林精制品(含量94.0%)、内标*精制品(含量97.2%);甲醇、乙腈均为一级色谱纯,纯度99.9%);水为去离子水;其余试剂均为分析纯。
*的色谱条件:色谱柱(150mm×4.6mm,5);流动相0.05mol-l磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.7g,溶于1000ml去离子水中,用氢氧化钾溶液调ph4.5,过滤)一乙腈(68:32),加0.3%三乙胺;流速1.0ml·min~;检测波长225nm;柱温25;进样量20trl;内标氟氯西林。*的色谱条件:岛津shim—packvp—ods色谱柱(150mm×4。6mm,5);流动相0.033mol·l磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.22g、*2.610g,溶于1000ml去离子水中用氢氧化钾溶液调ph7。2,过滤)一甲醇(88:12)流速1.0ml·min~;检测波长229nm;柱温20℃进样量20trl;内标*。
精密移取空白血浆450l,分别加人*或*标准工作液50,内标氟氯西林或替硝储备液5,混匀后,加入冷冻的甲醇500,旋涡混合,置于4℃冰箱15min,14000r·min一离心10min,取20l上清液进样。
色谱分离在上述色谱条件下,*及内标氟氯西林与血浆得到*分离,其保留时间分别为7.1min和5.5min。
 *具有两性化合物的性质,且与血浆中的极性物质性质相近,因此血浆样品预处理与色谱分离十分困难。资源等用固相萃取法、carlqvistj等用柱切换法来进行样品预处理,但仪器设备复杂、操作烦琐。故*hplc法多用直接沉淀蛋白法来处理血样,调控柱温的方式,建立了相同的样品预处理方法,不同的色谱条件分离分析人血浆中*和*的液相色谱法。
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