14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
进口elisa试剂盒检测步骤:
一、试剂的准备
从试剂盒中取出荧光pcr反应液(bc-qpcr mix)、酶混合物(enzymes mix),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的pcr反应管管数为n(n=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂每个反应加入的量n个反应加入的量
荧光pcr反应液 14µl n×14µl
酶混合物1 µl n×1 µl
总量15 µl n×15µl
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的n个pcr反应管中分别加入15μl荧光pcr反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(ntc)和阳性对照(bc-ptc)5μl,10000rpm瞬时离心10秒。
