实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶 2（mmp-2）水平。用纯化的人基质金属蛋白酶 2（mmp-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人基质金属蛋白酶 2（mmp-2），再与 hrp标记的 mmp-2抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 tmb显色。tmb在 hrp酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人基质金属蛋白酶 2（mmp-2）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（od值），通过标准曲线计算样品中人基质金属蛋白酶-2（mmp-2）浓度。
样本处理及要求：
血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血浆：应根据标本的要求选择 edta或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 pbs（ph7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 pbs，ph7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 pbs（ph7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.不能检测含 nan3 的样品，因 nan3抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在*、第二孔中分别加标准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉，再各取 50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为 9 μg/l，6 μg/l，3μg/l，1.5μg/l，0.75 μg/l）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。配液：将 30（48t的 20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48t的 20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。显色：每孔先加入显色剂 a50μl，再加入显色剂 b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
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