一、材料
抗体球蛋白溶液、0．5mol／l(ph9．0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1％硫柳汞水溶液、50ml小烧杯、4℃冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒、ph7．2或3．0的0．01mol／lpbs等。
二 、方法及步骤
抗体的准备
取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中，再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液，使最后免疫球蛋白浓度为20mg／ml，碳酸盐缓冲液容量为总量的1／10，混匀，将烧瓴置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5～10min。
荧光素的准备
根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克免疫球蛋白加0．01mg荧光色素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量，还可以算出需加缓冲液的量。1．蛋白溶液：含量amg／m1；容积bml。2．总蛋白量(axb)＝crag。3．c／20～c／10＝dmg(如蛋白含量低于20mg／ml，用c／10；如高于20mg／ml，用c／20)。4．荧光素fitc的量：(1／50～2／100)xc＝emg。5．巳0．5mol／l(ph9．5)碳酸盐缓冲液d／10＝fml。6． pbs量d-(b+f)=gml。
注：a为蛋白含量，mg／ml；b为蛋白质溶液的容积；c为蛋白总量，mg；d为常数，mg；正为荧光素的量，mg；f为碳酸盐缓冲液的容积，ml；g为pbs的容积，ml。
③结合(或标记) 边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5—10min内加完)，加完后，继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故需将烧杯和搅拌器一起移人4℃冰箱中。
④透析 结合完毕后，将标记的球蛋白溶液离心(2500r／min)20rain，除去其中少量的沉淀物，装入透析袋中，再置于烧杯中，用ph8．0缓冲盐水透析(0～4~c)过夜。
⑤过柱 取透析过夜的标记物，通过葡聚糖凝胶sephadexg-25或g—50柱，分离游离荧光素，收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液：0．01mol／l磷酸盐缓冲液(ph7．2)；过滤量：12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析)；收集量：20ml(稀释1．7倍左右)。