这是一个逐，因而需经涣散才干抵达反应的结尾。在这以后参与的酶符号抗体与固相抗原的联络也相同如此。这便是为何elisa查看试剂盒反应老是需要一定时间的温育。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃（冰箱温度）等。
进口原装elisa试剂盒测定技能的展开首要在于方法学的展开，而方法学的展开于试剂生产技能不断前进更新和型符号物的运用。
37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体联络的适合温度。在建立elisa方法作反应动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反应通常在37℃经1-2小时，商品的生成可达。
可前进反应的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以构成多的沉积。但因所需时间太长，在elisa查看试剂盒中通常不予选用。
反应的温度和时间仍是影响显色的要素。
tmb受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应查询效果。
但为保证进口原装elisa试剂盒实验效果的稳定性，宜在规矩的恰当时间阅读效果。tmb经hrp作用后，约40分钟显色达，随即逐渐削弱，至2小时后即可*阑珊至无色。tmb的中止液有多种，叠氮钠和sds等酶抑制剂均可使反应中止。这类中止剂尚能使蓝色坚持较长时间(12-24小时)不褪，是目视区分的出色中止剂。此外，各类酸性中止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。