产品货号：ba1258
产品规格：50管/24样
产品简介：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使nad+还原生成nadh和h+，h+传递给pms生成的pmsh2还原mtt生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。
技术指标：
最di检出限：0.0387μmol/ml
线性范围：0.039-1μmol/ml
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
提取液一
液体30ml×1瓶
4℃
提取液二
液体4ml×1瓶
4℃
试剂一
液体20ml×1瓶
4℃
试剂二
液体60μl×1瓶
4℃
试剂三
粉剂×1瓶
-20℃
试剂四
粉剂×1瓶
4℃
试剂五
粉剂×1瓶
-20℃
试剂六
液体5ml×1瓶
4℃
标准品
粉剂×1支
4℃
溶液的配制：
1.试剂二：液体置于试剂瓶内ep管中。临用前按试剂二（v）：蒸馏水（v）=10μl：450μl的比例配制试剂二溶液，现用现配；
2.试剂三：临用前加入12ml蒸馏水充分溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存一周；
3.试剂四：临用前加12ml蒸馏水充分溶解，4℃保存一周；
4.试剂五：临用前每瓶加入8ml蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存一周；
5.标准品：临用前加入1.04ml蒸馏水配成100μmol/ml的标准溶液；
6.显色液的配制：临用前根据用量按照试剂三（v）：试剂四（v）=1：1的比例充分混匀，现配现用。
需自备的仪器和用品：
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照质量（g）：提取液一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8ml上清液，再加入0.15ml提取液二，4℃12000g离心10min后取上清待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8ml上清液，再加入0.15ml提取液二，4℃12000g离心10min后取上清待测。
3.血清（浆）：取100μl血清（浆）加入1ml提取液一，4℃，12000g离心10min，取0.8ml上清液，再加入0.15ml提取液二，12000g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，波长调至570nm，乙醇调零。
2.标准液的稀释：将100μmol/ml的标准溶液用蒸馏水稀释为1、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039μmol/ml的标准溶液待测。
3.加样表：
测定管
对照管
标准管
空白管
样本（μl）
50
50
-
-
标准品（μl）
-
-
50
-
蒸馏水（μl）
-
10
-
50
试剂一（μl）
200
200
200
200
试剂二（μl）
50
-
50
50
试剂五（μl）
100
100
100
100
在ep管中充分混匀，于37℃水浴准确反应20min。
试剂六（μl）
30
30
30
30
显色液（μl）
300
300
300
300
37℃避光反应20min后于25℃，10000rpm离心10min，去上清，留沉淀。
乙醇（μl）
1000
1000
1000
1000
充分溶解沉淀后，于570nm处测定吸光值，分别记为a测定管，a对照管，a标准管，a空白管，计算δa测定=a测定管-a对照管；δa标准= a标准管-a空白管。
三、乳酸含量的计算
1.标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴，以其对应的吸光值（δa标准）为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将δa测定带入公式中得到x（μmol/ml）。
2.乳酸含量计算
（1）按照蛋白含量计算
la含量（μmol/mg prot）=x×v样本÷（v样本×cpr）=x÷cpr
（2）按照样本质量计算
la含量（μmol/g质量）=x×（v上清+v提取液二）÷（w×v上清÷v提取液一）=1.1875×x÷w
（3）按照细胞数量计算
la含量（μmol/106cell）=x×（v上清+v提取液二）÷（5×v上清÷v提取液一）=0.2375×x
（4）按照液体体积计算
la含量（μmol/ml）=x×（v上清+v提取液二）÷ [v液体×v上清÷（v提取液一+v液体）]=13.0625×x
v样本：加入的样本体积，0.05ml；w：样本质量，g；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml，蛋白浓度需自行测 定；v上清：提取时上清液体积，0.8ml；v提取液二：加入的提取液二体积，0.15ml；v提取液一：加入的提取液一体积，1ml；5：细胞数量，5×106个；v液体：液体样本体积，0.1ml。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。