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英瀚斯生物科技(图)-*细胞-河北细胞

2025/9/10 10:40:36发布33次查看
小鼠成骨细胞和*骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和*骨细胞,细胞培养,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行* 骨细胞*酒石酸酸性*酶(tartrate-resistant acid phosphatase,trap染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用rt- pcr对*骨细胞标志酶*基质金属蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和组织蛋白酶k (cathepsin k )的表达进行检测结果共培养5天后可观trap( )多核细胞形成13天trap( )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;*骨细胞标志*trap在共培养3天时开始表达,而mmp-9和cathepsin k则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对*骨细胞调控作用显著诱导的*骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和*骨细胞之间的相互调控作用研究.
透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,河北细胞,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。调亡i期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( c*itati)的空泡结构; iia 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生调亡小体。
软gu细胞培养
(1)豚鼠脱颈处死,备皮,用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。
(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉,软gu不能暴露),*细胞,75%酒精浸泡5分钟,细胞生物学实验,转移至pbs缓冲液中,带入超净工作台,剔除关节周围附着的软组织,打开髋、膝关节,用尖刀削取关节软gu组织,置入装有pbs缓冲液的无菌培养皿,防止软gu组织被风干。
(3)pbs缓冲液充分*洗软gu小块3次,然后用小剪刀将软gu块切碎至约imm3大小。
(4)再次用pbs缓冲液冲洗3次,滤干,将细小的软gu块置入放有0.2%的ii型胶原酶3ml的广口瓶里,摇匀后置于37°c恒温震荡箱中消化,40分钟后将上层消化液转移至15ml规格离心管中,800r/min离心5min,收集细胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清dmem培养液4ml并吹打混匀,制成软gu细胞混悬液。
(5)把消化所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中,经滤网过滤后用细胞计数板计数,并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于co2培养箱内。培养条件为37°c、5%co2。
(6)未消化完的软gu小块继续用ii型胶原酶如_上法消化,直至软gu块基本消失。
(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。
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