（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反响液，用洗刷液过洗一遍（将洗刷液注满板孔后，即甩去），以后将洗刷液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇摆。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗刷3-4次。
（4）阴性对照孔每孔参加pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔参加1：500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
（5）进口elisa试剂盒酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1：5000稀释的hrp-符号的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加tmb显色液 100μl，elisa试剂盒悄悄混匀10s，置37℃暗处反响15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/l h2so4停止反响。
（12）别离测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终究测得的od值为两者之差（w1-w2），以减少由容器上的划痕或指印等形成的光搅扰。
（13）数据处理：在得出标本（s）和阴性对照（n）的 od值后，核算s/n值。s/n≥2.1为阳性断定规范进口elisa试剂盒。