基因文库是储存了某种生物的dna片段的受体菌的集合体。文库分为储存全部dna片段和部分dna片段，前者叫基因组文库，后者包括cdna文库。
文库构建的基础是将目标rna或dna制备成可以和测序仪器兼容的形式。从组织或者细胞中将dna或rna提取出来，并通过机械破碎或者是酶切法对其进行片段化。如果前面提取的是rna样本，则需要将rna逆转录为cdna。对dna进行接头的连接后，一般还会有一个文库的扩增，即通过pcr来对所需的目的片段进行扩增，然后进行上机测序。
传统的dna文库构建包括：dna片段化（超声法）、末端修复、加a、接头连接和pcr文库扩增等过程（figure 1）。整个实验对dna起始量、仪器有一定的要求。
新型的文库构建方法利用转座酶的转座原理，对dna进行片段化并同时加上部分接头序列，是建库过程中是一个重大的进步。
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