将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、 细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1）. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。2）. 加2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3）. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。4）. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%dmso后进行冻存。