荧光强度跟很多因素有关,如分子结构、存在状态、溶液浓度或薄膜厚度、温度、选择的激发波长、测试狭缝宽度等因素。荧光强度在不同仪器上的测量值存在较大差异,不具有可比性,但是其峰位还是较容易确定的,可以用来判断何种物质。进行荧光定量分析,必须固定一些条件。
分子荧光分光光度计的基本结构分以下五种:
1.光源:为高压汞蒸气灯或氙弧灯,后者能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm-400nm范围内强度几乎相等,故较常用。
2.激发单色器:置于光源和样品室之间的为激发单色器或单色器,筛选出特定的激发光谱。
3.发射单色器:置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。
4.检测器:一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。
5.样品室:通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。丈量液体时,光源与检测器成直角安排;丈量固体时,光源与检测器成锐角安排。
