布鲁氏菌虎红平板凝集试验具体操作方法如下:
一、材料准备
1、布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌标准阳性血清、布鲁氏菌阴性血清。
2、受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血。
3、洁净的玻片或玻璃板。在其上划分成4cm2的方格。
4、微量移液器及无菌吸头。
5、干净牙签或火柴杆。
二、操作方法
1、在玻璃板各方格标记受检血清编号,然后加入相应的血清25μl(动物布鲁氏菌病诊断技术gb/ 18646-2018)。
2、在各待检血清旁滴加虎红抗原25μl。
3、用灭菌牙签类小棒快速混匀血清和抗原,涂成2cm直径的圆形,于4分钟内观察结果。
三、结果判定
在标准阴性血清不出现凝集、标准阳性血清出现凝集时,试验成立,方可对受检血清进行判定。凡出现肉眼可见凝集现象者(“+”以上反应)判为阳性。
虎红平板凝集试验判定标准:
“—”无凝集,呈均匀粉红色
“+”稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色。
“++”形成较明显卷边,凝集块间液体稍清亮。
“+++”凝集反应较强,液体较清亮。
“++++”凝集块呈菌丛状,凝块间液体明显清亮。
四、注意事项
布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原储藏温度:2-8℃,使用前需充分摇匀,务必恢复至室温或18度以上后再检测。
试验应设标准阴、阳性血清对照。
