培养大鼠心肌细胞时,需要注意以下几点:
1、鼠龄选择:新生1~3d龄大鼠的心肌细胞在出生后3d内具有部分的增殖能力,而成年大鼠的心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力。因此,建议选择1~3d龄的大鼠进行原代培养以获得更多活性心肌细胞。
2、细胞复苏:溶解细胞过程要迅速,已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除dmso。
3、细胞冻存:推荐配比为55%基础培养基+40%fbs+5%dmso的冻存液。在冻存时,尽量吹散细胞并注意控制吹打力度。
4、细胞培养:培养条件为培养基:dmem+10% fbs+1% p/s,推荐传代比例为1:2~1:4,换液频率为2~3次/周,培养箱温度设定为37℃,5% co2。传代操作包括:去掉培养皿中的培养基,加入pbs进行冲洗,去上清后加入0.25%胰酶进行润洗,去上清后放入co2培养箱消化2~4min,加入培养基终止消化并吹打均匀。
5、注意保持细胞汇合度在30%~90%,避免细胞过度生长和分化。
6、每一步操作都要轻柔小心,以免对细胞造成损伤。
7、选用优质培养基,减少有害物质对细胞的刺激。
