2、 用 10.0ml 吸管吸取 5.0ml～10.0ml 第 3 代培养物，接种罗氏瓶，并摇动使菌液布满 mea 培养基表面，将多余肉汤培养物液体吸出，置 30℃±1℃恒温培养箱中培养 42h～48h。
3、 向罗氏瓶培养物中加入 5.0ml～10.0ml 0.05%（v/v）吐温 80 生理盐水溶液，刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中，将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇 1min ，过滤除去菌丝后，显微镜下（400 倍）观察是否仍有菌丝存在，若有可经 5000 r/min～6000 r/min离心 20min。再次在显微镜下（400 倍）观察，必要时重复上述步骤。
4、 黑曲霉菌分生孢子悬液冷藏保存不超过 2d，使用前，混合均匀，在显微镜下（400 倍）观察是否有孢子出芽，若有则不得使用。
5、 将制成的菌悬液，进行活菌培养计数，按其结果用稀释液稀释至所需浓度，悬液定量杀灭试验时，菌悬液浓度为1×107cfu/ml～5×107cfu/ml。