百合的繁殖一般采用小鳞茎、鳞片、珠芽等器官进行无性繁殖。其缺点是繁殖系数低,长期无性繁殖还会导致病毒积累引起品种退化。 在百合研究生产中,已利用组织培养技术进行快速繁殖,以解决引种过程中,由于无性繁殖系数低造成的难于快速扩大推广的困难。我国上海百合试管苗早已出口荷兰。在新品种培育、茎尖脱毒苗培养上,组织培养也是有效方法。 1.外植体 百合的鳞茎盘,鳞片、珠芽、叶片、茎段、花器官各部和根等等,用作外植体,都有能分化成苗。各种外植体培养时,都可切割成5-8毫米左右的小块或切段。 2.材料消毒 洗净的材料,先用70%的酒清浸摇30-60秒,然后用饱和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液消毒10-20分钟(视材料健幼而异),无菌水漂洗4-8次,即可按无菌操作切块(段)接种。花器官等培养时,常取未开放的花蕾,消毒后切开,取其内材料接种。 3.培养条件 温度20-25℃,光照800-1200lux,每天9-14小时照明,培养基ph值为5.6-5.8。 4.培养基和培养结果 一般用琼脂固体培养基,常用配方是ms+蔗糖或白糖30克/升,按需加入各种植物激素。 (1)无菌种子播种 用1/2ms,不加任何激素。种子可萌发为无菌实生苗。 (2)鳞片、叶片培养 用ms+ba 0.1~1.0+naa0.1~1.0毫克/升。对于不同种或品种的百合,激素含量与种类不同,以后鳞片或叶片都可产生小鳞茎状突起而分化成苗。在高naa低ba的培养基上,可1次形成完整植株,但幼苗根部有肿胀现象。相反,高ba低naa时,能形成大量小鳞茎状突起,从中分化出芽而无根。这样的苗子可转入生根培养基上(ms+iaa1+ba0.2,或ms+naa0.8~1.0毫克/升+ba0.2毫克/升,培养基ph值为5.8。或用naa、iba代替iaa),使其壮苗生根。杜永芳等采用abt生根粉替代naa和iba,对百合组培苗有良好的发根效果,最适浓度为0.3毫克/升。将生根的植株直接移入营养钵中易于成活。 (3)茎段、花柱和珠芽的培养 用ms+iaa1+ba0.2毫克/升,可以直接分化出芽。在花器官中以花丝为材料,优于花柱和子房。麝香百合花器培养的植株,生长约6个月以后,即可开花。 (4)根的培养 以毛百合根为材料,在ms+naa0.5~1.0毫克/升的培养基上,形成肿胀的粗根,将其切成小段,转到ms+ba2+naa0.2的培养基上培养,便能分化出苗。而轮叶百合在上述培养基上不形成肿胀的根段。毛百合试管苗经5-6个月后,能形成直径17毫米左右的鳞茎,移栽后成活情况良好。一些品种如rainbow hybrid和pink perfection的试管苗移栽后一年半,即开出大而美丽的花朵。 (5)胚培养 培养时仍以ms培养基较好,蔗糖浓度视种类而异,常在20-40克/升间。ph什以5.0较为适宜,naa用量只宜在0.01-0.001克/升间,加入适量ba有利幼胚成活。高ba会抑制胚根的产生,并促进胚组织愈伤组织化。通常先用ms+ba1+naa0.1培养促进愈伤组织生长,然后将长大的愈伤组织转移到1/2ms不加任何激素的培养基上,约2个月后,可形成大量的不定芽,延长培养时间,就会生根,产生出完整的杂交后代。 (6)百合无病毒培养 百合主要受花叶病毒等侵染,引起品种退化,鳞茎变小。培育无病毒苗仍是当前防治病毒的有效方法。因为病毒在植物体上的分布是不均匀的。幼嫩的茎尖分生组织中病毒含量微少。甚至不含病毒植株。 取材:在消毒的百合嫩梢上取0.2-0.3毫米的茎尖分生组织,或先进行鳞片培养(通过砂培或试管培养),待形成小球茎后,在其上剥离分生组织进行培养。 培养:接种好的百合茎尖分生组织,通常置于25-28℃的温度,光照强度初期1000-1500勒克斯、后期3000勒克斯,16/8小时的光暗周期的条件下培养。采用过的培养苗有: white、barker、kassanis、改良ms以及nielsen等。