试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被人5核苷酸酶(5-nt)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物tmb显色，tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人5核苷酸酶(5-nt)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（od 值），计算样品浓度。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μl；
3. 样本孔中加入待测样本50μl；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗体100μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μl），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μl，15min内，在450nm波长处测定各孔的od值。