一、骨髓瘤细胞具有无限分裂能力,由于该细胞并非高度分化细胞,因此分裂能力较强,而其它肿瘤细胞分裂能力较弱,因此多在制备单克隆抗体时与b淋巴细胞融合,使单克隆抗体迅速大量增殖。
二、同时骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,这样的瘤细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。
三、选择骨髓瘤细胞的条件:①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致;②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外;③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度,106个细胞/ml;④生长速度快,繁殖时间短。
目前常用的balb/c小鼠产生的骨髓瘤细胞株有:①s194/5xxo?bu?1;②sp2/0—ag14(简称sp2);③p2—x? ?—ag8?6?5?3(简称653);④fo
以653z为常用,它是由矿物油4-甲基-15烷(pristane,降植烷)诱发出来的一种浆细胞瘤(minerol oil plasmacy toma,mopc)并经过培育形成一株8-氮鸟嘌呤有抵抗力的亚系。
原代细胞一般由有关单位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,试验时复苏、增殖、传代即可。
由于骨髓瘤细胞是半贴壁状态,很容易脱落,因此不需要胰酶处理。为了防止出现返祖现象,在融合前,可将培养基内加入15μg/ml 8-氮鸟嘌呤。取约1×107~6×107对数生长期(即培养15h~20h)的骨髓瘤细胞,在室温离心(400g)10min,沉淀以2.5%fcs—1640液再悬浮并计数。
鉴别 甘氨酸 对照品 110735-200102 200mg
含量测定 芍药苷 对照品 110736-200526 20mg
含量测定 异补骨脂素 对照品 110738-200511 20mg
含量测定 补骨脂素 对照品 110739-200511 20mg
含量测定 秦皮甲素 对照品 110740-200406 20mg
含量测定 秦皮乙素 对照品 110741-200506 20mg
含量测定 熊果酸 对照品 110742-200516 20mg
原代细胞
