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油茶issr反应体系建立及优化

2025/5/31 14:02:15发布22次查看
以改进的ctab高盐法提取油茶嫩叶总dna,进行简单重复序列间扩增(issr)分析,分别测试了退火温度、模板dna浓度、mg^2+浓度.dntps浓度,taqdna聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响.油茶issr分析的最适反应体系为t在20μl pcr反应体积中.含20ng模板dna,2.5mmol·l^-1mgcl2,0.2mmol·l^-1dntps·1utaqdna聚合酶,0.5pmol·μl^-1引物.1%去离子甲基酰胺,扩增程序为,94℃预变性2min;94℃变性30π,52℃退火30s,72℃延伸90s.反应38个循环;最后在72℃延伸7min.完成机构:江西省植物生物技术重点实验室,江西南昌330032
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