1、插上半干转印仪的电源,打开仪器开关,用双手按住仪器两段的上面的按钮,手指向上抬,拿下半干转印仪上面的阳极电极板。
2、tris/*-sds-page结束后,取出凝胶,在tris/*缓冲液中漂洗数秒。取凝胶方法:用刀片将两玻璃板分开,将多余的凝胶划去,上部以浓缩胶为准全部弃去,下部以分子量标准小分子带下一点全部划去,取一10ml注射器注满转印缓冲液,插入玻璃板与凝胶之间注水,使水的压力将两者自然分开,边推边进,反复多次注水,直至凝胶从玻璃板上滑落下来。
3、将nc膜和滤纸切出与凝胶一样大小,置转移缓冲液中湿润5-10min、
4、按照以下顺序放置滤纸,凝胶和nc膜到半干槽中。
5、每层之间的气泡要全部去除。可以用10ml吸管轻轻在上一层滚动去除气泡,然后用*缘的塑料片中间挖空与凝胶一样大小或略小一点,以防电流直接从没有凝胶处通过造成短路,盖好加上阳极电极板。
6、按下set键,设置转印的时间及电压,确定后仪器开始运行。
7、转膜结束后,将膜取下封闭,关掉电源开关,拔下电源,并清洁半干转印仪。
注意在操作过程中要按照电源线颜色将电泳仪插在电泳仪上,否则蛋白印迹不会被转到nv膜或是pvdf膜上。
