rna干扰(rna interference， rnai)现象是一种进化上保守的抵御转*或外来病毒qin犯的防御机制。将含有靶*mrna同源互补序列的rna（double strand rna， dsrna）导入细胞后，能够特异地识别该mrna，引起mrna的降解，从而导致相应的功能缺失。rnai提供了一种经济、快捷、gao效的*特异*表达的技术手段，该技术已被广泛用于研究*功能和chuan染性疾病及恶xingzhong瘤*zhi疗领域。目前常用的rna干扰手段为mirna、 shrna和sirna等。
mirna是一类可以通过rnai机制调节*表达的内源性小rna，人工mirna与shrna的设计原理基本相同，由于mirna具有内源性，因此其更易产生有效的*沉默。
技术流程：
dsrna或pre-mirna被导入细胞后，能够被一种特异的核酸内切酶（dicer）识别并切割成为小片段，这些片段在rna解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶（包括内切酶、外切酶、解旋酶等）结合形成rna诱导的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc），*检测多少钱，risc与mrna同源区进行特异性结合，若mirna与mrna的结合位点配对，则切割mrna；若mirna与mrna的结合位点不配对，则*mrna的翻译。
逆转录病毒构建及包装
逆转录病毒（retrovirus）是一类rna病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒rna为模板合成cdna再通过dna、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白表达系统，由逆转录病毒载体、辅助载体（表达病毒包装需要的蛋白质）和包装细胞系组成。逆转录病毒载体在外源*表达、*沉默、、生物制药等得到广泛的应用。逆转录病毒载体主要优点：转染范围广，可以各种细胞类型，转入的外源*可完全融合，对细胞率高，dna检测，细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源*。
逆转录病毒载体系统共有两部分组成：包装细胞系和缺陷病毒本身。在逆转录病毒载体中，去除了正常的蛋白编码序列而保留了和包装信号，通过分子技术将目的*插入此载体上，而包装细胞系能提供病毒载体包装成病毒粒子所需的结构蛋白。当重组病毒载体导入包装细胞后，缺陷病毒载体和包装细胞的互补作用共同完成病毒装配，该病毒颗粒可其它宿主细胞，此时目的*进入该细胞并整合到细胞*组中，导致插入序列在宿主细胞中表达，产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构*的逆转录病毒提供结构蛋白，因而在宿主细胞内不会产生新的毒颗粒，保证了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。
单核苷酸多态性( snp )实验
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性 ，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(polymorphi*)。据估计，在人类*组中，荧光定量pcr，大约每千个碱基中有一个snp ，无论是比较于度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ，都要广泛得多。
实验方法原理:
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(polymorphi*)。据估计，在人类*组中，大约每千个碱基中有一个snp ，无论是比较于限制性段长度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ，都要广泛得多。snp是我们考察遗传变异的单位，据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个snp位点。-般认为，相邻的snps倾向于一起遗传给后代。 于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的snp等位位点称作单体型( haplotype b大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率)，它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多snp位点，pcr，但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签snps(tagsnp)来进行*分型，获取大部分的遗传多态模式。
*检测多少钱-英瀚斯(在线咨询)-pcr由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司为客户提供“组织病理,细胞生物,分子生物学平台,动物模型医学科研外包服务”等业务，公司拥有“英瀚斯”等品牌，专注于技术合作等行业。，在江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼a301的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：戴经理。