根据细胞类型不同,悬浮培养的接种密度通常介于2× 104 cells/ml到5 × 105 cells/ml之间,有些细胞甚至可以达到2 x 106 cells/ml。如果细胞接种密度过低,他们将经历一个生长停滞期,细胞生长十分缓慢甚至全部死亡。但是如果接种密度过高的话,细胞会很快将培养基内的营养成分耗竭,然后突然死亡。请参照说明书了解推荐接种密度、传代比例、培养基更换时间表以及推荐使用的培养基等具体信息。
悬浮培养细胞传代步骤:
1.事先将*培养基自冰箱内拿出,平衡至室温。
2.使用移液枪吹打重悬培养在静置培养容器内的细胞,使细胞悬液充分混匀。取适量细胞悬液用血球计数板计算细胞密度。
3. 根据说明书推荐的低接种密度及步骤2算出的细胞密度,计算需要接种到新培养容器内的细胞悬液体积以及需要加入的新鲜培养基的量。
4. 在新的培养容器内加入步骤3计算出的所需添加的新鲜培养基及细胞悬液。如有必要,可在培养容器内充满无菌过滤的co2,封好培养容器并置于合适的温度下孵育培养。
5. 通常情况下,细胞培养换液时不需要每次都*更换成新的培养基,除非细胞密度非常高或者是培养基的ph偏酸性(培养基颜色偏黄)。如需*更换培养液,将细胞悬液在125g离心力下离心10 min,吸弃旧培养基,然后使用新鲜培养基重悬细胞。
含量测定 百秋李醇 对照品 110772-200404 30mg
含量测定 阿魏酸 对照品 110773-9910 50mg
含量测定 青藤碱 对照品 110774-200507 20mg
含量测定 胡椒碱 对照品 110775-200203 20mg
含量测定 香草酸 对照品 110776-200402 50mg
含量测定 柴胡皂苷a 对照品 110777-200405 20mg
含量测定 柴胡皂苷d 对照品 110778-200404 20mg
含量测定 氧化* 对照品 110780-200405 20mg
含量测定 黄芪甲苷 对照品 110781-200512 20mg
细胞培养
