切取含有目的dna 片段的琼脂糖凝胶条带。
● 尽量切除不含有目的dna 部分的凝胶，减少凝胶体积，提高dna 回收率。
● 切胶时，请使用长波长uv （360 nm ）光盒。且不要将dna 长时间暴露在紫外灯下，以防dna 损伤。
2 称取凝胶的重量近似地确定其体积。
● 凝胶重量的称量方法：取.5 ml 离心管电子天平称初质量，切胶装在离心管后称终质量，两者差即为胶的质量。不同离心管的重量可能有差异，因此，每个离心管的重量需单独称量。
3 按照每00 mg 琼脂糖凝胶对应00 µl 溶液bd 的比例，向离心管中加入溶液bd。
4 50 ℃水浴7-0min，直至凝胶*溶化。期间需要振荡混合3 次。
● 琼脂糖必须*融化，以免堵塞柱子，严重影响dna 段的回收效率。
● 如果总体积大于500 µl，可适当增加溶胶时间。
● 若此时溶液变红，可加0 µl 3m naac （ph 5.2）。
5 将步骤4 所获溶液置于dna 纯化柱中，静置2min 。
● 胶块*溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在较高温度时结合dna 的能力较弱。
6 2,000 rpm 离心min。若溶液量大于dna 纯化柱的容积，可分两次离心，弃滤液。
● 此时dna 被吸附于dna 纯化柱中的硅胶膜上。
7 加入500 µl 溶液bd。2,000 rpm, 离心min，弃滤液
8 加入500 µl 溶液pe。2,000 rpm, 离心min，弃滤液。
● 溶液pe 初次使用前用无水乙醇按: 4 稀释，即含80% 乙醇。
● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量dna 段。
9 加入500 µl 溶液pe。2,000 rpm, 离心min，弃滤液。
0 2,000 rpm 离心 3min ，以*去除纯化柱中的液体。
● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于dna 段的充分溶解。
将离心柱置于新的.5 ml 离心管中。向纯化柱的处，悬空滴加30-00 µl 溶液eluent （60℃预热），静置2min 。2,000 rpm 离心min，管底即为目的dna 段。贮存于-20℃。
● 溶液eluent 可用无菌双蒸水代替，但其ph 需为8.0-8.5，加入体积视dna 目的段的多少、用户对目的浓度要求而定。
● 对溶液eluent 60℃预热，会提高提取dna 目的段的产量。
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关键词：电子天平