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PCR检测试剂盒技术原理方法

2025/3/9 18:31:03发布41次查看
pcr检测试剂盒技术原理:
dna的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在dna聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,dna在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制dna的变性和复性,并设计引物做启动子,加入dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的体外复制。( dna高温变性低温复性)
发现耐热dna聚合同酶--taq酶对于pcr的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使pcr技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,pcr技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
pcr检测试剂盒注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物a应挥发,避免长时间打开盖子。底物b对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取od值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物a、b液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用
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