pcr反应需要以双链dna作为模板，因此最初的pcr反应用于检测目标样本的基因组中是否存在特定的目的片段，但是这种以基因组dna为模板的pcr反应无法检测目的基因是否在样本中表达，此外由于真核生物的基因中存在内含子，直接通过基因组dna进行pcr也很难确定样本中是否存在目的基因，针对这一问题，发展出了逆转录pcr的技术。
rt-pcr技术原理：
逆转录pcr (reverse transcription pcr，rt-pcr) 是以mrna为模板，在逆转录酶作用下合成cdna，之后再进行pcr的过程。
mrna逆转录合成cdna的过程分为两步：
在特定引物的介导下，通过逆转录酶的催化下以mrna为模版合成互补的cdna第一链；
升高温度使cdna第一链与mrna解离，然后降温，使其与另一引物退火结合，并由dna聚合酶催化延伸生成cdna第二链。
rt-pcr使rna检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量rna样品的分析成为可能，该技术主要用于分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cdna探针、构建rna高效转录系统。
逆转录反应体系：
1. rna模板
通常20μl的逆转录体系，加入总rna 1μg，如果总rna加入过多，会导致逆转录不充分。
2. 引物
常用的有随机引物和oligo(dt)引物：
随机引物会将所有rna分子均进行逆转录，此时得到的cdna大部分来源于rrna，主要在部分mrna含有逆转录酶终止序列而难以得到其全序列时使用；
oligo(dt)与真核生物mrna的poly(a)区域匹配，可以特异性的对mrna进行逆转录。
3. 逆转录酶
逆转录过程涉及以rna为模板合成dna和以dna为模板合成互补链的两个过程，目前市场上的逆转录酶都同时具有这些功能，因此只需在反应体系中加入逆转录酶即可，而不需额外加入dna聚合酶。
4. 4种dntps