1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，每个孔中加入detection ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加hrp conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。
7.每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(od值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
小鼠细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4 (mouse ctla-4)
小鼠细胞色素p450(mouse cytochrome p450)
小鼠c反应蛋白(mouse crp)
小鼠cxc趋化因子受体3(mouse cxcr3)
小鼠cxc趋化因子配体16(mouse cxcl16)
小鼠cxcl1/kc(mouse kc)
小鼠环磷酸腺苷(mouse camp)
小鼠环磷酸鸟苷(mouse cgmp)
小鼠睫状神经营养因子(mouse cntf)
小鼠可溶性cd36分子(mouse scd36)
小鼠scd40配体(mouse scd40 ligand)
小鼠cd34(mouse cd34)
小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(mouse scd40l)
小鼠补体c3a(mouse c3a)
小鼠补体c5a(mouse c5a)
小鼠血清总补体(mouse ch50)
小鼠肌酸激酶(mouse ck)
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse ck-mb)
小鼠羟甲基赖氨酸(mouse cml)
小鼠c-肽(mouse c-peptide)
小鼠心肌钙蛋白t(mouse ctnt)
小鼠粒细胞集落刺激因子(mouse g-csf)
小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse gm-csf)
小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mouse m-csf)
小鼠细胞色素c(mouse cytochrome c)
小鼠双链dna(mouse dsdna)
小鼠多巴胺(mouse dopamine)
小鼠二胺氧化酶(mouse dao)
小鼠d-二聚体(mouse d-dimer)
小鼠二肽基肽酶ⅳ(mouse dpp4)
小鼠β内啡肽(mouse β-ep)
小鼠表皮生长因子(mouse egf)
小鼠表皮生长因子受体(mouse egf r)
小鼠内皮素-1(mouse endothelin-1)
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse eotaxin)
小鼠促红细胞生成素(mouse epo)
小鼠红细胞生成素受体(mouse epor)
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ecp)
小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ena-78)
小鼠血管内皮抑素(mouse endostatin)
小鼠肾上腺素(mouse epi)
小鼠内皮细胞一氧化氮合酶(mouse enos)