（1）硅胶填料
硅胶填料主要应用正相色谱及反相色谱柱中，正相色谱用的固定相通常为硅胶（silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团(nh2,aps)和氰基团（cn，cps）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（sioh）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（hexane）,氯（chloroform）,二氯甲烷（methylenechloride）等。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有c18（ods）、c8（mos）、c4（b）、c6h5（phenyl）等。
（2）聚合物填料
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在ph值为1～14均可使用。相对与硅胶基质的c18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
（3）其他无机填料
其它hplc的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于hplc流动相中不会被溶解，这类柱可在任何ph与温度下使用。氧化铝也可用于hplc，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在ph高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料也可用于hplc，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用ph范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。