液相色谱仪的原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相气体、液体、通过一固 定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。
液相色谱仪方法建立实验开始之前，应明确对方法的这些要求：
(1)主要目的是什么？定量或定性，还是定性、定量同时做？
(2)是否有必要解析出样品的所有成分？譬如可能有必要分离出产品中的所有降解物或杂质，以使含量测定结果更加可靠，但却没必要将它们彼此分开。
(3)如要求定量分析，准确度与精密度需多大？样品主要成分的精密度通常能达到±1—2%，特别是不需样品预处理的情况。
(4)特殊化合物可能会以不同的样品形式出现(如：原料药，一种或多种形态，环保样品等)。是否需要一种以上的hplc方法？单一方法分离不同形态样品是否理想？
(5)一次将分析多少样品？当必须同时处理大量样品时，运行时间将变得非常重要。
有时甚至为了缩短运行时间而以牺牲样品分离度作代价，如缩短柱长或加快流速。当一次分析的样品数目超过10个，运行时间一般应控制在20min以内。
(6)将要使用该方法的实验室中，有哪些hplc设备？色谱柱能否恒温系统能否做梯度洗脱？该方法是否可在不同设计与生产的设备上运行？