dnase i ， 即 deoxyribonucleasei， 即脱氧核糖核酸酶 i， 是一种可以消化单链或双链dna产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。dnasei水解单链或双链 dna后的产物， 5'端为磷酸基团，3'端为羟基。
dnasei活性依赖于钙离子， 并能被镁离子或二价锰离子激活 。镁离子存在条件下，dnasei可随机剪切双链 dna的任意位点；二价锰离子存在条件下，dnasei可在同一位点剪切 dna双链，形成平末端， 或 1 -2 个核苷酸突出的粘末端。
特点：不含 rnase(rnasefree)， 可以用于各种 rna样品的处理 。提供了用于 dnasei 失活所需的 edta。
用途：制备不含 dna的 rna样品；rt-pcr反应前 rna样品中去除基因组 dna等可能的 dna污染；体外 t7, t3, sp6 等 rnapolymerases催化的 rna转录后去除 dna模板；dnaseifootprinting研究 dna-蛋白质相互作用； 缺口平移(nicktranslatioin)； 产生 dna随机片段文库； 细胞凋亡 tunel检测中部分剪切基因组 dna作为阳性对照。
来源：从牛胰腺纯化得到 。分子量： 约 32kda(单体)。
活性定义：37°c10 分钟内，将能够降解 1 μgpbr322 质粒 dna所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：40mm tris-hcl(ph8.0) ， 10mmmgso4， 1mmcacl2 ， 1 μgofpbr322dna。纯度：不含其它 dna内切酶和外切酶，不含 rna酶。
保存条件：
-20°c保存， 一年内有效。
操作流程：
1 rt-pcr反应前 rna样品中 dna的去除：
1.1 dna模板限制性核酸内切酶作用后线性化。酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取 dna，用乙醇沉淀后， 溶于适量的无菌去离子水中。
1.2 向一无 rna酶的 ep管中依次加入下列试剂：
rna
1 μg
反应缓冲液(10×)
1μl
补充经 depc处理的去离子水
至9 μl
dnasei(1u/μl)
1μl
注意：如需处理较大量的 rna样品， 可以按照比例放大上述反应体系 。如果能在上述反应体系中加入适量 ribonucleaseinhibitor以防止 rna降解则更佳。
1.3 37°c孵育 30min。
1.4 向上述反应体系中加入 1 μl25mm edta，65°c 孵育 10min， 以失活 dnase i 。注意：在 没有鏊合剂如 edta等存在情况下加热， rna可被水解。
1.5上述加热处理过的 rna样品即可直接用于处理好的 rna可用作 rt-pcr反应的模板。
2体外 rna反转录后模板 dna的去除：
2.1 在每含有 0.5 μg模板 dna的反转录反应体系中加入 1udnasei。注意：在某些情况下，模板 dna消化所需的 dnasei的量需通过实验进行摸索。
2.2 37°c孵育 15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活 dnasei。
3缺口平移进行 dna标记
3.1 参考如下表格设置反应：
reactionbuffer(10×) fordnapolymerasei
2.5 μl
3dntpmixture(1mmeach, withoutthelabeleddntp) *
1.25μl
[α -32p]-dntp, ~110tbq/mmol(3000ci/mmol)
1.85 -3.7mbq(50 -100μ ci)
dnasei(freshlydilutedto0.002u/μl)**
1μl
dnapolymerasei, e.coli
0. 5-1.5 μl (5 -15u)
templatedna
0.25μg
补充无核酸酶去离子水
至25μl
*3 dntpmixture(1mmeach, withoutthelabeleddntp)：分别取除已经标记的 dntp外的 3种 dntp(100mm) 各 1 μl加入到 97μl的无核酸酶的去离子水中混匀即可 。例如标记的为datp，则需混合 dttp、dctp和 dgtp三种 dntp至每种的最终浓度为 1mm。配制好的 dntp 可存放于 -20°c以备后续使用。
**dnasei可以用 1 × reactionbufferfordnapolymerasei进行稀释。
reactionbuffer(10 ×) fordnapolymerasei： 500mmtris-hcl(ph7.5 at25°c) ， 100mm mgcl2 ， 10mm dtt。
3.2 立即 15°c孵育 15~60min。
3.3 上述反应体系中加入 1μl0.5medta(ph8.0)终止反应。
3.4 从中取出少量例如 1 μl检测标记效率 。通常标记效率至少可以达到 108cpm/μgdna。
3.5 可用 sephadexg-50 或 bio-gelp-60 去除[α -32p]-dntp， 以纯化获得标记的 dna。
温馨提示：
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服， 带手套等。