2. 前言 2014 年 1 月 15 日中国烟草总公司颁布了烟草及烟草制品中 多种农药残留量的测定的行业标准 yq/t 47.1—2014，其中*部分为串接气质检测农药残留的方法。该标准于 2014 年 2 月 10 正式实施。赛默飞世尔科技针对这一行业标准，开发了 烟草中检测多农残的方法。 本实验用 tsq 8000 evo 结合赛默飞世尔科技农残分析色谱柱 （tr-pesticide ii 30 m*0.25 mm*0.25 µm）分析烟草中的 122 种农药残留，得到了非常出色的结果。各种农药的低检测 限在 0.004ppb-0.75ppb 之间，在 5 ppb–200 ppb 的范围有 良好的线性，且用 10 ppb 样品连续 5 针进样，得到 rsd 在 1.01%–9.69% 之间，表明此方法具有良好的重现性。
3. 实验部分 3.1 仪器和色谱柱 tsq 8000 evo 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（thermo scientifictm 美 国），tr-pesticide ii 农 残 分 析 柱（30 m*0.25 mm*0.25 µm 带 5m 预柱）
3.2 仪器方法 gc 方法： 传输线温度：300ºc。 ptv 进样口：起始温度为 70ºc，进样时间 0.05 min；然后 以 4.5ºc/min 升至 280ºc，保持 1 min，将所有化合物通过 程序升温的进样方式转移至色谱柱；随后以 14.5ºc/min 升至 320ºc，保持 5 min，设置进样口的清洁模式。不分流进样，不分流时间 1.5 min。 载气：恒流，1.2 ml/min； 柱温箱：40ºc 起始保持 1.5 min，以 25ºc/min 升至 90°， 保持 1.5 min；再以 25ºc/min 的速率升至 180ºc；随后以 5ºc/min 的速率升至 280ºc；后以 10ºc/min 的速率升至 300ºc，保持 5 min。整个升温程序 35 min。 进样量：2 µ
质谱方法： 离子源温度：300 ºc，灯丝电流为 25 µa，采用 t-srm 方法， 无需分时间段。部分方法如图 1 所示（总共 402 对 srm 离子 对）：
3.3 前处理方法 提取 称取 2 g 样品于 50 ml 具盖离心管中，至 0.01 g，加 入 10 ml 水（4.1），手持离心管振荡直至样品与水充分混合 后，静置 10 min。分别移取 10 ml 乙腈（4.2）和 0.1 ml 混 合内标工作溶液（4.11.4）于该离心管中，并置于漩涡混合 振荡仪（5.2）上以 2000 r/min 速率振荡 2 min。将离心管在 （-18℃ ~-20℃）条件下冷冻保存 10 min 后，取出。向离心 管中分别加入 5 ml 甲苯（4.3）、4 g 无水*（4.4）、1 g 氯化钠（4.5）、1 g 柠檬酸钠（4.6）、0.5 g 柠檬酸氢二钠（4.7）， 立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪 （5.2）上以 2000 r/min 速度振荡 2 min，然后以 4000 r/min 离心 5 min。收集上层清液备用。
净化 移取 1.5 ml 样品提取液上层清液（7.1）于 2 ml 离心管中， 加入 150 mg 无水*（4.4）和 50 mg n- 丙基乙二胺键合 固相吸附剂（4.8），于漩涡混合振荡仪（5.2）上以 2000 r/ min 速率振荡 2 min，以 4000 r/min 离心 5 min，收集上层清液， 待检测分析。
4. 实验结果 4.1 auto srm 优化部分化合物的离子对信息 tsq 8000 evo 的整个实验流程可以参考图 2。tsq 8000 evo 自带的 tracefinder 软件有一个数据库，该数据库包含常规三 重四极杆串接气质上分析的 1000 多种化合物离子对信息，如 农药，环境污染物等化合物。所以，当我们需要完成手头上化 合物的方法建立时，可以首先参考数据库中的离子对信息。数 据库中查不到的化合物离子对信息，可以使用 tsq 8000 evo *的 autosrm 软件来自动完成。
autosrm 顾名思义就是可以自动优化化合物 srm 离子对的软 件，该软件通过选择母离子，选择子离子，自动优化碰撞能 量这三个步骤可以完成方法优化，*得简化了常规串接气质 建立化合物检测方法的步骤，节省了时间。赛默飞世尔科技全 新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪 tsq 8000 evo *的 autosrm 功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当 一次优化的化合物数目较多时，可以智能得调整进样的次数以 期在少的时间内得到优化的方法，使得整个方法建立部分 更加简单方便。
4.2 标准曲线 分别配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混标溶液，采用内标法定量，内标为莠去津或者三苯基磷酸酯（按 照保留时间来确定以哪种物质为内标，本实验保留时间在 20 min 之前的化合物都以莠去津为内标，20 min 之后以三苯基磷酸酯为 内标）。下表列出所有 122 种化合物的标准曲线方程以及线性相关系数，可以看出，应用 tsq 8000 evo 快速扫描检测这 122 种 化合物，可以得到良好的线性方式，有利于定量的准确性。
4.3 重现性及低检出限 用10ppb的样品重复进样5针，检测方法的重现性。所得的重现性结果如下图所示，所有的化合物的重现性在1.01%-9.69%之间（如 表 2 所示）。 分别配置 100ppt、200ppt、500ppt、1ppb 以及 2ppb 的样品，按照 s/n 为 3 和 s/n 为 10 来估算化合物的低检出限及低定量限。
4.4 烟草中农残检测的方法包 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提 出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的 能在 gc/ms 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯 联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作 用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法、数据处理方法（tracefinder 方法文件 夹）、相关应用文章、相关标准、色谱柱信息、前处理方法， 数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成 化合物的定性定量分析。
由于 tsq 8000 evo 采用 t-srm 进样方法而不是分时间段的 扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会 有微小的偏差，也不会影响终的结果。另外，tracefinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包 括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离 子、cas 号等信息。同时，tracefinder 软件可以根据数据处 理方法自动关联生成 tsq 8000 evo 的方法文件。这样应用 tracefinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。 整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作 信息。
想要快速建立方法时，直接拷贝方法包中的文件夹到 c:\ tracefinderdata\32\methods 中，方法就可以在 tracefinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。
5. 结论： 应用 thermo scientifictm 三重四极杆串接气质联用仪 tsq 8000 evo，可以快速分析烟草中的农药残留。方法学验证表明，该 方法的线性、检出限、rsd 值均满足 yq/t 47.1—2014 烟草及 烟草制品多种农药残留量的测定以及 yq 50—2014 烟叶农药 大残留*的要求。应用 thermo fisher 方法包，可以快速建 立进样方法和数据处理方法，拿来即用，无需从数据库中整合 信息建立方法，而是直接用现成的方法，节省大量时间，提高 分析效率。一级和二级高分辨质谱数据，保证了定性和定量结 果的可靠性；媲美三重四极杆的灵敏度和宽线性范围可轻 松定量药物中的痕量杂质。与三重四极杆质谱相比，q exactive focus 采用一级质谱定量不需要优化母离子，子离子参数，仅利 用目标化合物精密分子质量即可实现准确定量，更为方便快速。 采用二级高分辨质谱定量可以记录子离子全扫描信息，通过在 数据后处理中灵活的挑选更具有专属性的子离子进行定量，有 效的排除基质干扰，选择性更好，灵敏度更高。