病毒灭活试验病毒悬液的制备:
1、从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在37°c温水中迅速融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min,3min),去上清液。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有10培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。
2、取出低温冻存的试验病毒毒种,37°c水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37°c温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。
3、将含病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管1.0分装于无菌离心管(1.5)中。
4、取1支病毒悬液,按病毒滴度测定法,测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80°c备用。
