当然作为一款精密仪器,液相色谱仪对于操作具有一定的要求,而在使用时,难免可能发生一定的问题,今天我们就来讲讲面对柱压问题,使用液相色谱仪应该注意的要点。
对于液相色谱仪来说,柱压的稳定与色谱图峰的好坏、柱效、分离效果及保留时间等都有所关联。一般来说,柱压问题主要集中在压力过高、压力过低两方面。
压力过高
压力过高一般指液相色谱仪使用时压力突然升高的问题。
原因1:流路中存在堵塞
解决方法:进行分段检查。首先断开真空泵的入口处,此时peek管里充满液体,使peek管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。处理方法用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。
打开purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。处理方法将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100psi以下,过滤白头正常。
把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。问题无法解决可考虑更换色谱柱。
原因2:流速设定不正确
解决方法:重新设定正确流量。
原因3:流动相配比不正确
解决方法:不同配比的流动相其黏度系数不相同,较高黏度的流动相相应的系统压力也大,如果可能可更换黏度较小的溶剂或重新设定配比。
原因4:系统压力零点漂移
解决方法:调节压力传感器的零点。
压力过低
原因1:系统泄漏
解决方法:寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的地方旋紧即可。拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜。
原因2:泵里进混入空气,此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体
解决方法:打开purge阀,用3~5ml/min的流速冲洗,如果不行,则要用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
原因3:无流动相流出
解决方法:检查储液瓶中有无流动相,沉子是否浸在流动相中,泵是否运行。
原因4:参比阀未关闭
解决方法:将流速降低后关闭参比阀。一般降至0.1~0.2ml/min后关闭参比阀。
